Sastav "DNA-sorb-PCR" kompleta za izolaciju DNK. Reagensi za pročišćavanje i izolaciju nukleinskih kiselina sintol

""DNA-sorb-S-M" ® AmpliSens FBUN Centralni istraživački institut za epidemiologiju Rospotrebnadzora, Samo za istraživanja Ruska Federacija, 111123 i druge nemedicinske svrhe, Moskva, ..."

INSTRUKCIJE

o upotrebi kompleta reagensa

za ekstrakciju DNK iz biološkog materijala

"DNK-sorb-S-M"

AmpliSense

Centralni istraživački institut za epidemiologiju FBUN

Rospotrebnadzor,

Samo u istraživačke svrhe

Ruska Federacija, 111123,

i druge nemedicinske svrhe

Moskva grad, ulica Novogireevskaya, zgrada 3A

LISTA SKRAĆENICA

SVRHA

PRINCIP METODE

OBLICI POPUNJAVANJA

VAĐENJE DNK IZ BIOLOŠKOG MATERIJALA IZ ŽIVOTINJA................ 8

HRANA ZA ŽIVOTINJU ILI BILJNE SIROVINE

SIMBOLI KORIŠTENI U ŠTAMPANIM PROIZVODIMA

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 2 od 15

LISTA SKRAĆENICA

IN ovog uputstva Koriste se sljedeće skraćenice i oznake:

DNK – deoksiribonukleinska kiselina NA – nukleinske kiseline OK – negativna kontrola ekstrakcije OKO – negativna kontrola uzorak PC – pozitivna kontrola ekstrakcija PKO – uzorak pozitivne kontrole PCR – lančana reakcija polimeraze

– Federalni organizacija koju finansira država nauke

Centralni istraživački institut FBUN

"Centralni istraživački institut za epidemiologiju i epidemiologiju" Federalna služba za nadzor u oblasti Rospotrebnadzora za zaštitu prava potrošača i ljudskog blagostanja

SVRHA

Komplet reagensa “DNA-sorb-S-M” namijenjen je ekstrakciji DNK iz biološkog materijala životinja: tkiva (biopsija (koža i sluzokože) genitourinarnog sistema, gastrointestinalni trakt, bronhije), hirurški i obdukcijski) materijal; i ekstrakcija DNK iz hrane, bioloških aditiva, stočne hrane ili biljnog materijala za naknadno istraživanje korištenjem lančane reakcije polimeraze (PCR).

Ekstrakcija DNK je preanalitička procedura PCR metode.

Volumen ispitnog uzorka za ekstrakciju: 100 µl (dozvoljeni su uzorci zapremine od 10 do 100 µl ili težine od 10 do 100 mg)1.

PAŽNJA! Za informacije o postupku prikupljanja, uslovima transporta i skladištenja test materijala, potrebi i postupku njegove pripreme za ekstrakciju DNK, kao i informacije o interferirajućim supstancama i ograničenjima vezanim za uzorak, pogledajte uputstva za set reagensa koristi se za pojačanje.

PRINCIP METODE

Ispitni uzorak2 tretira se rastvorom za lizu koji sadrži proteinazu K, što dovodi do razaranja ćelijskih membrana i oslobađanja NK i ćelijskih komponenti. Rastvoreni NC se vezuju za čestice sorbenta, dok ostale komponente liziranog test materijala ostaju u rastvoru i uklanjaju se tokom taloženja sorbenta.U zavisnosti od materijala koji se testira, pogledajte uputstva za korišćeni komplet reagensa za pojačavanje.

Neke vrste biološkog materijala zahtijevaju korak pripreme uzorka. Cm.

uputstva za komplet reagensa koji se koristi za amplifikaciju.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 3 od 15 centrifugiranjem i naknadnim ispiranjem sorbenta. Kada se sorbentu doda pufer za eluiranje, NC prelazi sa površine silicijum dioksida u rastvor, koji se odvaja od čestica sorbenta centrifugiranjem. Kao rezultat ove procedure, dobija se visoko prečišćen NA preparat, bez inhibitora reakcije amplifikacije, što obezbeđuje visoku analitičku osetljivost PCR studije.

OBLICI POPUNJAVANJA

Komplet reagensa dostupan je u 2 konfiguracije:

Obrazac 1 uključuje set reagensa “DNA-sorb-S-M” verzija 50.

Obrazac 2 uključuje set reagensa “DNA-sorb-S-M” verzija 100.

MJERE PREDOSTROŽNOSTI I INFORMACIJE O ODLAGANJU

Prilikom proučavanja biološkog materijala od životinja, rad se mora obavljati u skladu sa pravilima Ministarstva poljoprivrede i nafte Ruske Federacije od 27. januara 1997. br. 13-7-2/840 „Pravila za obavljanje poslova u dijagnostici laboratorije koje koriste metodu lančane reakcije polimeraze. Osnovne odredbe”, odobreno od strane Zavoda za veterinu.

Prilikom proučavanja prehrambenih proizvoda, bioloških aditiva, stočne hrane ili biljnih sirovina, rad se mora izvoditi u skladu sa zahtjevima smjernica MU 1.3.2569-09 „Organizacija rada laboratorija primjenom metoda amplifikacije nukleinske kiseline pri radu sa materijal koji sadrži mikroorganizme patogenih grupa I-IV" i GOST R 53214-2008 "Prehrambeni proizvodi. Metode analize za genetsku detekciju modifikovani organizmi i proizvodi dobijeni od njih.

Opšti zahtjevi i definicije."

Prilikom rada morate se uvijek pridržavati sljedećih zahtjeva:

– Laboratorijski proces treba da bude jednosmjeran. Analiza se vrši u odvojenim prostorijama (zonama). Radovi bi trebali započeti u zoni ekstrakcije i nastaviti u zoni pojačanja i detekcije. Nemojte vraćati uzorke, opremu ili reagense u područje u kojem je obavljen prethodni korak procesa.

– Neiskorišteni reagensi, reagensi kojima je istekao rok trajanja, kao i Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 4 od 15 korištenih reagensa, ambalaže3, biološkog materijala, uključujući materijale, instrumente i predmete kontaminirani biološki materijal , treba odložiti u skladu sa zahtjevima SanPiN 2.1.7.2790-10 „Sanitarni i epidemiološki zahtjevi za upravljanje medicinskim otpadom“.

– Koristite i mijenjajte vrhove za jednokratnu upotrebu za automatske filter pipete pri svakoj operaciji4. Plastični pribor za jednokratnu upotrebu mora se odložiti u poseban kontejner koji sadrži sredstvo za dezinfekciju koje se može koristiti za dezinfekciju medicinski otpad.

– Posuđe (malter i tučak) i metalni instrumenti (skalpeli, makaze, pincete, nastavci za blender, itd.) koji se koriste za pripremu uzoraka drže se u dezinfekcionom rastvoru (na primer, 0,2% rastvor natrijumove soli dihloroizocijanurske kiseline) jedan sat , isprati vodom iz slavine sa deterdžentima surfaktantima i nakon pranja u tekućoj i dejonizovanoj vodi sušiti u suvo zagrejanoj rerni 4 sata na temperaturi od 180 C.

– Komplet reagensa je namijenjen za jednokratnu upotrebu za provođenje istraživanja navedenog broja uzoraka (pogledajte odjeljak „Sastav“).

– Komplet reagensa je spreman za upotrebu prema ovim uputstvima.

Koristite komplet reagensa isključivo za njegovu namenu.

– Nemojte koristiti komplet reagensa ako je unutrašnje pakovanje oštećeno ili izgled Reagens ne odgovara opisu.

– Nemojte koristiti komplet reagensa ako se ne poštuju uslovi transporta i skladištenja u skladu sa uputstvima.

Neiskorišteni reagensi, reagensi kojima je istekao rok trajanja, korišteni reagensi, ambalaža spadaju u klasu opasnosti medicinskog otpada G.

Vrhovi za jednokratnu upotrebu bez filtera koriste se za uklanjanje supernatanta tokom procesa ekstrakcije pomoću vakuumskog aspiratora.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 5 od 15

– Nemojte koristiti komplet reagensa nakon isteka roka valjanosti.

– Koristite jednokratne rukavice bez pudera, laboratorijske mantile i zaštitu za oči kada radite s uzorcima i reagensima. Nakon završetka rada dobro operite ruke. Sve operacije se izvode samo u rukavicama kako bi se izbjegao kontakt s ljudskim tijelom.

– Izbegavati udisanje para, kontakt sa kožom, očima i sluzokožom, ne gutati. U slučaju kontakta, odmah isperite zahvaćeno područje vodom i, ako je potrebno, potražite savjet liječnika. medicinsku njegu.

– Sigurnosni listovi reagensa (SDS – sigurnosni list) dostupni su na zahtjev.

Procjena vjerovatnih događaja koji mogu rezultirati negativne posljedice za ljudski organizam:

Kada se koristi prema namjeni i pridržavaju se gore navedenih mjera opreza, kontakt s ljudskim tijelom je isključen.

U vanrednim situacijama moguće je sljedeće:

– iritacija sluzokože očiju kod osetljivih osoba,

– iritacija kože kod osetljivih osoba,

- alergijska reakcija,

– šteta ako se udiše,

- Štetno ako se uzima oralno.

Specifični efekti kompleta reagensa na ljudski organizam:

– Nema kancerogenog efekta.

– Nema mutagenog efekta.

– Nema reproduktivnu toksičnost.

DODATNI MATERIJALI I OPREMA

(sa naznakom proizvođača/dobavljača):

1. 1,5 i 5,0 mL epruvete od polipropilena za jednokratnu upotrebu na navoj ili čvrsto zatvorene (npr. Axygen, Inc.

("Exigen, Inc"), SAD ili slično).

2. Jednokratni vrhovi za pipete promjenjivog volumena sa filterom do 200 i do 1000 µl (na primjer, Axygen, Inc., SAD ili slično).

3. Jednokratni vrhovi za pipete promjenjivog volumena do 200 µl (na primjer, Axygen, Inc., SAD ili slično).

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 6 od 15

4. Stalci za epruvete od 1,5 ml (npr. Axygen, Inc., SAD ili slično).

5. Hauba za laminarni protok, klasa biološke sigurnosti II tip A (na primjer, „BAVp-01-“Laminar-S”-1,2”, JSC “Laminar Systems”, Rusija, ili slično).

6. Termostat za Eppendorf cijevi od 25 do 100 °C (na primjer, SIA Biosan, Latvija, ili slično).

7. Termostat-tresač za Eppendorf cijevi od 25 do 100 °C (na primjer, TS-100, SIA Biosan, Latvija, ili slično).

8. Mikrocentrifuga za Eppendorf epruvete sa maksimalna brzina centrifugiranje od najmanje 12 hiljada g (na primjer, MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Njemačka, ili slično).

9. Vortex (na primjer, SIA Biosan, Latvija, ili slično).

10. Medicinski vakuum aspirator sa bocom za odstranjivanje supernatanta (na primjer, “OM-1”, LLC “Utes”, Rusija, ili slično).

11. Automatski dozatori promjenjive zapremine (na primjer, Biohit LLC, Rusija, ili slično).

12. Frižider od 2 do 8 °C sa zamrzivačem od minus 24 do minus 16 C.

13. Odvojeni ogrtač, kape, cipele i jednokratne rukavice prema MU 1.3.2569-09.

14. Jednokratna plastične posude za odlaganje i inaktivaciju materijala.

–  –  –

VAĐENJE DNK IZ BIOLOŠKOG MATERIJALA OD ŽIVOTINJA

2. Odaberite potreban broj jednokratnih polipropilenskih epruveta od 1,5 ml sa navojnim ili čvrsto pričvršćenim poklopcima (uključujući negativne i pozitivne kontrole ekstrakcije, ako su predviđene za PCR studiju).

Prilikom skladištenja pufera reagensa za lizu i otopine za ispiranje 1 na temperaturi od 2 do 8 C, moguće je formiranje taloga u obliku kristala.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 8 od 15

3. Dodajte 10 µl BKO6 u svaku epruvetu (ako je predviđeno za PCR istraživanje). Dodajte 400 µl pufera za reagens za lizu i 17 µl reagensa za lizu u epruvete.

4. Dodajte 100 µl test uzoraka6 u pripremljene epruvete, koristeći poseban vrh sa filterom za svaki uzorak.

PAŽNJA! 400 µl pufera za reagens za lizu i 17 µl reagensa za lizu može se dodati u epruvetu sa potrebnom količinom uzorka za ispitivanje i tu se može dodati 10 µl BKO7 (ako je predviđeno za PCR istraživanje), koristeći posebne nastavke sa filter.

5. Dodajte 100 μl NCO u epruvetu za ekstrakciju negativne kontrole (NC), dodajte 90 μl NKO i 10 μl PCO u epruvetu za ekstrakciju pozitivne kontrole (PC) (ako su kontrole ekstrakcije predviđene za PCR studije).6

6. Čvrsto zatvorite poklopce, dobro promiješajte i promiješajte kapi.

Stavite epruvete u termostat sa temperaturom od 64 °C na 1 sat, povremeno miješajući vortexom (5 puta svakih 10-12 minuta). Inkubacija je dozvoljena 12 sati na temperaturi od 60 °C.

7. Peletne neotopljene čestice uzorka centrifugiranjem u trajanju od 5 minuta na 10 hiljada g (na primjer, 12 hiljada o/min za MiniSpin mikrocentrifugu, Eppendorf Manufacturing Corporation).

8. Uzmite supernatant tečnost u zapremini od 200–350 µl veoma pažljivo (izbegavajući suspendovane čestice i kapljice masti) koristeći posebne vrhove sa filterima i prebacite u nove epruvete. Sedimentirajte kapi vorteksom.

9. Resuspendirajte univerzalni sorbent, snažno miješajući pomoću vrtloga. Dodajte 25 µl resuspendiranog univerzalnog sorbenta u svaku epruvetu sa posebnim vrhom, dobro zatvorite poklopce.

Miješajte vortexom, ostavite na rešetki 10 minuta, miješajući svake 2 minute.

Moguće je mijenjati volumen testnih i kontrolnih uzoraka; pogledajte upute za korišteni set reagensa za amplificiranje.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 9 od 15

18. Ponovite postupak pranja u skladu sa paragrafima. 15–16, potpuno uklonite supernatant.

19. Stavite epruvete sa otvorenim poklopcima u termostat na 64 °C na 5-10 minuta da se osuši univerzalni sorbent.

20. Dodajte 50–100 μl pufera B za eluiranje u epruvete (pogledajte uputstva za korišćeni komplet reagensa za pojačavanje).

Mešajte vortexom dok sorbent ne bude potpuno resuspendovan. Stavite u termostat na 64 °C na 5-10 minuta, povremeno miješajući (jednom u minuti) pomoću vortexa.

Prečišćena DNK se može čuvati na temperaturi od 2 do 8 °C nedelju dana, na temperaturi od minus 24 do minus 16 °C 6 meseci, a na temperaturi koja ne prelazi minus 68 °C godinu dana. Da biste to učinili, potrebno je, bez hvatanja sorbenta, prenijeti supernatantnu tekućinu u novu epruvetu.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 10 od 15

VAĐENJE DNK IZ HRANE, BIOLOŠKI DODATCI,

HRANA ZA ŽIVOTINJU ILI BILJNE SIROVINE

PAŽNJA! Za postupak pripreme biološkog materijala za ekstrakciju DNK i zapreminu uzorka za ispitivanje, pogledajte uputstva za korišćeni komplet reagensa za amplifikacija.

1. Zagrijte pufer reagensa za lizu i otopinu za ispiranje 1, ako su čuvani na temperaturi od 2 do 8 °C, na temperaturi od 64 °C dok se kristali potpuno ne otope.

2. Postavite epruvete od 1,5 ml sa prethodno obrađenim uzorcima za testiranje u stalak (volumen/količina uzorka, pogledajte uputstva za korišćeni komplet reagensa za pojačavanje).

3. Pripremite polipropilensku epruvetu od 1,5 mL za jednokratnu upotrebu sa navojem ili poklopcem koji dobro prijanja za negativnu kontrolu ekstrakcije (EC). Dodajte 100 µl OKO u epruvetu.

4. Dodajte 400 μl pufera za reagens za lizu i 17 μl reagensa za lizu u epruvete sa uzorcima za testiranje i TC.

5. Čvrsto zatvorite poklopce, dobro promiješajte i promiješajte kapi.

Stavite epruvete u termostat s temperaturom od 64 °C na 1 sat, povremeno miješajući vortexom (5 puta svakih 10-12 minuta), ili koristite termostat za mućkanje.

6. Peletne neotopljene čestice uzorka centrifugiranjem 5 minuta na 10 hiljada g (na primjer, 12 hiljada o/min za mikrocentrifugu MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Odaberite potreban broj novih jednokratnih polipropilenskih epruveta od 1,5 ml sa navojnim ili čvrsto pričvršćenim poklopcima.

8. Resuspendirajte univerzalni sorbent, snažno miješajući pomoću vrtloga. Dodajte 25 µl resuspendiranog univerzalnog sorbenta u svaku epruvetu sa posebnim vrhom, dobro zatvorite poklopce.

9. Iz epruveta sa liziranim uzorcima uzmite supernatantnu tečnost u zapremini od 200–350 µl veoma pažljivo (izbegavajući ulazak suspendovanih čestica i kapi masti) koristeći posebne vrhove sa filterima i prenesite u epruvete sa sorbentom. Miješajte vortexom, ostavite na rešetki 10 minuta, miješajući svake 2 minute.

Obrazac 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / strana 11 od 15

10. Centrifugirajte epruvete u mikrocentrifugi 1 minut na 2 hiljade g (na primer, 5 hiljada obrtaja u minuti za MiniSpin mikrocentrifugu, Eppendorf Manufacturing Corporation).

11. Bez hvatanja sorbenta, uklonite tečnost supernatanta iz svake epruvete posebnim vrhom bez filtera od 200 µl, koristeći vakuum aspirator.

12. Dodati 300 μl otopine za pranje 1 u epruvete, dobro zatvoriti poklopce i vrtložno miješati dok se univerzalni sorbent potpuno ne suspendira.

13. Centrifugirajte epruvete u mikrocentrifugi 1 minut na 2 hiljade g.

14. Bez hvatanja sorbenta, uklonite tečnost supernatanta iz svake epruvete posebnim vrhom od 200 µl bez filtera, koristeći vakuum aspirator.

15.U epruvete dodati 500 μl otopine za ispiranje 2, dobro zatvoriti poklopce i vrtložno miješati dok se univerzalni sorbent potpuno ne suspendira

16. Centrifugirajte epruvete u mikrocentrifugi 1 minut na 7 hiljada g (na primer, 10 hiljada obrtaja u minuti za MiniSpin mikrocentrifugu, Eppendorf Manufacturing Corporation).

17. Bez hvatanja sorbenta, uklonite tečnost supernatanta iz svake epruvete sa posebnim vrhom od 200 µl bez filtera, koristeći vakuum aspirator.

18. Ponovite postupak pranja u skladu sa paragrafima. 15-16, potpuno uklonite supernatant.

19. Stavite epruvete sa otvorenim poklopcima u termostat na temperaturi od 64 °C na 5-10 minuta da se osuši univerzalni sorbent.

20.U epruvete dodajte 50 µl pufera za eluiranje B. Mešajte vortexom dok se sorbent potpuno ne suspenduje. Stavite u termostat na 64 °C na 5-10 minuta, povremeno miješajući (jednom u minuti) pomoću vortexa.

21. Centrifugirajte epruvete u mikrocentrifugi 1 minut na 10 hiljada g. Supernatant sadrži prečišćenu DNK. Uzorci su spremni za PCR.

Prečišćena DNK se može čuvati na temperaturi od 2 do 8 °C nedelju dana, na temperaturi od minus 24 do minus 16 °C 6 meseci i na temperaturi Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12 /27/16 / strana 12 od 15 ne više od minus 68 °C tokom cijele godine. Da biste to učinili, potrebno je, bez hvatanja sorbenta, prenijeti supernatantnu tekućinu u novu epruvetu.

ROK TRAJANJA, UVJETI TRANSPORTA I SKLADIŠTENJE.

Najbolje do datuma. 12 mjeseci Ne mogu se koristiti kompleti reagensa kojima je istekao rok trajanja. Rok trajanja otvorenih reagensa odgovara datumu isteka naznačenom na etiketi za neotvorene reagense, osim ako je drugačije navedeno u uputstvu.

Prijevoz. Komplet reagensa treba transportovati na temperaturama od 2 do 8 C ne duže od 5 dana u termalnim kontejnerima koji sadrže hladne elemente, svim vrstama pokrivenih vozila. Po prijemu rastaviti u skladu sa navedenim temperaturama skladištenja.

Skladištenje. Čuvajte komplet reagensa na temperaturi od 2 do 25 C, osim reagensa za lizu. Reagens za lizu čuvajte u frižideru na temperaturi od 2 do 8 C.

Rashladne komore moraju da obezbede regulisane temperaturne uslove.

Lizni rastvor 30 cm 3,

Rastvor za pranje 1 30 cm 3,

Koncentrat za rastvor za čišćenje 2 20 cm 3,

Sorbentna suspenzija 2 cm 3,

Pufer za eluiranje DNK 4 cm 3 .

Operativni postupak:

Pripremite rastvor za čišćenje 2 tako što ćete pomešati 20 cm 3 koncentrata iz kompleta, 80 cm 3 destilovane vode i 100 cm 3 96% etanola u posebnoj boci. Čuvajte rastvor na sobnoj temperaturi u čvrsto zašrafljenoj boci.

Provjerite stanje sorbenta - kada se taloži, trebao bi zauzeti približno polovinu volumena suspenzije.

U dobro zatvorenu polipropilensku epruvetu od 1,5 cm 3 (po mogućnosti sa poklopcem na navoj), dodajte 100 µl prethodno pripremljenog uzorka za testiranje, negativnog ili pozitivnog uzorka, dodajte 300 µl rastvora za lizu (u svaki uzorak sa posebnim vrhom) i promiješajte temeljno pipetiranjem 3-10 puta.

Dodajte 15 - 20 µl resuspendiranog sorbenta, dobro promiješajte vortexom, stavite u rešetku na 5-7 minuta za potpunu sedimentaciju sorbenta.

Sedimentirajte sorbent u mikrocentrifugi 30 sekundi pri 3-8 hiljada o/min. Uzmite supernatant iz svake epruvete pomoću posebnog vrha (zgodno je koristiti vakuumsko usisavanje).

Dodati 300 µl otopine za pranje 1, miješati vortexom dok se sorbent potpuno ne resuspendira (ako se sorbent jako razbije, razbiti ga pipetom), sedimentirati u centrifugi na 4-8 tisuća o/min 30 sekundi. Sakupite supernatant iz svake epruvete koristeći poseban vrh.

Dodati 800 μl otopine za ispiranje 2, vorteksirati dok se sorbent potpuno ne suspendira, sedimentirati u mikrocentrifugi na 6-10 hiljada o/min 30 sekundi i sakupiti supernatant.

Ponovite korak 6, pažljivo odaberite supernatant, osušite sediment sorbenta u termostatu na 65 °C 5 minuta.

Resuspendirajte sorbent u 30-40 μl pufera za eluiranje, stavite u termostat na 65°C na 5 minuta, periodično protresajući vortexom.

Sedimentirajte u mikrocentrifugi maksimalnom brzinom 1 minut.

Uzorak je spreman za PCR; supernatant sadrži pročišćenu DNK.

Kao negativnu kontrolu tokom koraka ekstrakcije DNK potrebno je koristiti fiziološki rastvor ili dejonizovanu vodu.

Efikasnost ekstrakcije DNK pomoću DNA-sorb-PCR kompleta je 30 – 60%.

Klinički materijal	Plazma, serum	Struganje, sperma, ispiranje ždrijela, urin	Biopsija, krv, izmet
Broj pipetiranja
Volumen sorbenta
Brzina taloženja sorbenta	8 hiljada o/min	6 hiljada o/min	3-4 hiljade o/min
Volumen eluenta
Efikasnost ekstrakcije DNK

5.2. Faza 2. Postavljanje PCR sastava kompleta za PCR amplifikaciju:

5x reakcijski pufer 1000 µl (viskozni, transparentno plavi rastvor)

Dejonizirana voda.2000 µl

Smjesa nukleotida.500 µl

Taq polimeraza.100 µl

Smjesa prajmera.500 µl

Vosak za PCR.2000 µl

Pozitivna kontrola: 100 µl

Negativna kontrola 100 µl

Mineralno ulje 4000 µl

Komplet se čuva na minus 20°C godinu dana.

Metoda brze ekstrakcije DNK mikrokolona je dizajnirana za ekstrakciju ukupne DNK iz krvi, plazme, pljuvačke, urina, ćelijskih kultura i svih ćelijskih peleta u puferu. Visoka čistoća izolovane DNK omogućava joj da se koristi za sve vrste analiza.

vrijeme izolacije se kreće od 30 do 45 minuta u zavisnosti od broja uzoraka;

• efikasno vezivanje DNK za membranu kolone omogućava vam da dobijete najveći prinos DNK iz uzorka;
• visok stepen prečišćavanja postiže se zahvaljujući optimizovanom sastavu komponenti rastvora za liziranje i pranje;
• značajno smanjena fragmentacija i gubitak DNK tokom pranja u poređenju sa drugim metodama ekstrakcije sorbentom;
• moguće je koncentrirati DNK smanjenjem volumena rastvora za eluiranje;
• Ekstrakcija DNK na kolonama značajno smanjuje potrošnju dodatne plastike;
• maksimalni volumen uzorka - 200 µl;
• komplet sadrži proteinazu K;
• čistoća izolovane DNK je 1,8-1,9 prema odnosu A260/A280;
• količina izdvojene DNK zavisi od vrste i količine uzorka. Prinos DNK iz 200 µl krvi u prosjeku iznosi 5-6 µg.

Set reagensa za izolaciju genomske DNK "DNA-Extran"

Koristeći komplete za izolaciju genomske DNK serije DNA-Extran, možete izolirati DNK iz raznih bioloških materijala: krvi, kultura bakterijskih i životinjskih stanica, svježih, smrznutih ili osušenih tkiva životinja i biljaka.

• potpuna ekstrakcija DNK iz ćelija, minimiziranje gubitka i fragmentacije DNK tokom prečišćavanja;
• izolirana DNK ima visoki nivočistoće (odnos A260/A280 = 1,8-1,9) i pogodan za PCR, restrikcijsku digestiju, hibridizaciju i druge studije;
• kompleti ne sadrže potencijalno opasne komponente kao što su fenol i hloroform, ne zahtijevaju velike količine plastike i ne stvaraju toksični otpad.

Set reagensa za ekstrakciju DNK na magnetnim česticama "M-Sorb-Tube"

Prilagođeno za izolaciju mikobakterijske DNK iz sputuma, ispiranja bronhija, cerebrospinalne tekućine, eksudata, punktata, biopsije, urina, iscjetka genitalnog trakta i ćelijskih kultura. Preliminarna obrada kliničkog materijala vrši se u skladu sa standardnim procedurama za pripremu uzoraka za mikrobiološka ispitivanja (Naredba br. 109 Ministarstva zdravlja Ruske Federacije od 21. marta 2003. „O poboljšanju mjera protiv tuberkuloze u Ruska Federacija“, Prilog 11 „Uputstva za objedinjene metode mikrobioloških istraživanja u otkrivanju, dijagnostici i liječenju tuberkuloze”). Za inaktivaciju kliničkog materijala preporučujemo korištenje inaktivirajuće otopine A koju smo razvili.

Rešenje A ubija mikobakterije u roku od 12 sati i dezinfikuje klinički materijal, koji se može koristiti za dalje analize (ekstrakcija DNK, PCR, itd.). Otopina A je prilagođena posebno za tretman sputuma i u potpunosti zamjenjuje standardnu ​​proceduru korištenjem NaOH-NALC otopine i ima izuzetna svojstva mukolize. Inaktivaciona otopina A povećava prinos DNK u poređenju sa standardnom pripremom uzorka NaOH-NALC.

Tehnika izolacije uključuje: lizu DNK sa gvanidin izotiocijanatom, sorpciju DNK na magnetnim česticama, precipitaciju DNK centrifugiranjem, faze ispiranja i eluciju DNK. Može se koristiti za izolaciju DNK od drugih mikroorganizama.

upotreba magnetnih čestica obloženih silika gelom kao sorbenta je tehnološki napredniji i praktičniji format u odnosu na druge sorbente i omogućava maksimalnu standardizaciju i automatizaciju tehnike ekstrakcije DNK;

Interna pozitivna kontrola (IPC) se dodaje u svaki test uzorak; prisustvo/odsustvo RT-PCR inhibitora i efikasnost ekstrakcije DNK određuju se reakcijom IPC amplifikacije.

Kompleti reagensa za ekstrakciju DNK iz prehrambenih proizvoda i prehrambenih sirovina

Kompleti reagensa “Sorb-GMO-A” i “Sorb-GMO-B” dizajnirani su posebno za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala, prehrambenih proizvoda i hrane za životinje. Oba kompleta koriste silicijumski sorbent za pročišćavanje DNK. “Sorb-GMO-A” sadrži gvanidin hlorid kao sredstvo za lizu, “Sorb-GMO-B” je jonski CTAB deterdžent, koji osigurava maksimalan prinos DNK iz biljnih komponenti. Distinctive Features Prednosti kompleta Sorb-GMO-A su brzina ekstrakcije DNK i odsustvo hloroforma, što rad sa kompletom čini sigurnijim.

Set reagensa za ekstrakciju DNK iz uzoraka vode (na magnetnim česticama) "M-Sorb-Leg"

Dizajniran za izolaciju DNK legionele iz vodna tijela okruženje(rashladni tornjevi, bazeni, vodeni parkovi, sistemi za snabdijevanje toplom i hladnom vodom). Minimalna izolovana koncentracija legionele je 100 ćelija na 0,5 litara uzorka.

Komplet “M-Sorb-Leg” se proizvodi u dvije modifikacije: “M-Sorb-Leg1000” za uzorke vode zapremine 1-1000 ml i “M-Sorb-Leg1” za uzorke vode zapremine do 1 ml. M-Sorb-Leg1000 set omogućava filtriranje vode pomoću polikarbonatnog filtera.

M-Sorb-Leg set reagensa omogućava vam da se riješite PCR inhibitora prisutnih u jako kontaminiranim uzorcima vode;

• Tehnika izolacije DNK temelji se na sorpciji DNK na magnetnim česticama obloženim silika gelom nakon čega slijedi precipitacija sa reagensom za taloženje. Kombinira prednosti metode sorpcije i metode totalne precipitacije;
• Interna pozitivna kontrola (IPC) se dodaje u svaki test uzorak; prisustvo/odsustvo inhibitora RT-PCR određuje se reakcijom IPC amplifikacije.

Set reagensa za ekstrakciju DNK iz objekata okoline (na magnetnim česticama) "M-Sorb-OOM"

M-Sorb-OOM set reagensa namijenjen je izolaciji DNK iz objekata okoline (zemlja, vode, leševa životinja itd.) za koje se sumnja da su zaraženi posebno opasnim mikroorganizmima (DOM), kako bi se pripremili za naknadnu analizu pomoću RT-PCR . Procedura izolacije je slična onoj opisanoj za komplet M-Sorb-Leg.

Set reagensa za izolaciju RNK "RNA-Extran"

Komplet je namijenjen za izolaciju RNK iz krvi, fragmenata tkiva i ćelijskih kultura. RNK dobijena korišćenjem RNA-Extran kita može se koristiti i za RT-PCR i za analizu hibridizacije, in vitro translaciju i kloniranje.

Princip izolacije RNK zasniva se na kiseloj fenolnoj ekstrakciji po Khomčinskom, u kojoj samo RNK ostaje u vodenoj fazi, a DNK u kompleksu sa proteinima prelazi u organsku fazu. Gvanidin tiocijanat se koristi kao izolacijski i denaturirajući agens za ćelijske nukleaze.

omogućava vam da dobijete visoko pročišćenu RNK, bez DNK nečistoća;

omogućava potpunu ekstrakciju RNK iz pune krvi, fragmenata tkiva i ćelijskih kultura;

omogućava vam da dobijete neoštećenu RNK;

• Vrijeme izolacije RNK - 1 sat.

Kataloški broj	Ime	broj reakcija
EX-509	Set reagensa “DNK-Extran-1” za izolaciju genomske DNK iz pune krvi	100
EX-511	Set reagensa “DNA-Extran-2” za ekstrakciju DNK iz životinjskih i ljudskih tkiva	100
EX-512	Set reagensa “DNA-Extran-3” za ekstrakciju DNK iz bakterijskih kultura	100
EX-513	Set reagensa “DNA-Extran-4” za ekstrakciju DNK iz biljnih tkiva	100
EX-514	Set reagensa “K-Sorb” za izolaciju ukupne DNK na kolonama (iz krvi, pljuvačke, urina, ćelijskih kultura, struganja epitelnih ćelija)	100
EX-515	Set reagensa "RNA-Extran" za izolaciju RNK iz krvi, tkiva, ćelijskih kultura	50
OM-505	Set reagensa “M-Sorb-Tub” za ekstrakciju DNK iz kliničkih uzoraka i staničnih kultura (na magnetnim česticama)	50 ili 100
GM-502-50	“SORB-GMO-A” (gvanidin + sorbent) Set reagenasa za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala i prehrambenih proizvoda	50
GM-503-50	“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Set reagenasa za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala i prehrambenih proizvoda	50
OM-506	Set reagensa “M-Sorb-Leg1000” za izolaciju DNK legionele iz uzoraka vode do 1000 ml (na magnetnim česticama filteri se isporučuju posebno)	50 ili 100
OM-507	Set reagensa “M-Sorb-Leg1” za izolaciju DNK legionele iz uzoraka vode zapremine do 1 ml (na magnetnim česticama)	50 ili 100
OOM-502	Set reagensa “M-sorb-OOM” za ekstrakciju DNK iz objekata okoline (na magnetnim česticama)	50 ili 100

Informacije o naručivanju

Ime	Volume	Proizvodnja	Metoda	Kat.br.
“GMO-MagnoSorb” (gvanidin + magnetni sorbent) Set reagensa za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala i prehrambenih proizvoda	50 izdvajanja	Synthol	PCR u realnom vremenu	GM-505-50
“SORB-GMO-A” (gvanidin + sorbent) Set reagenasa za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala i prehrambenih proizvoda	50	Synthol	PCR u realnom vremenu	GM-502-50-50
“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Set reagenasa za ekstrakciju DNK iz biljnog materijala i prehrambenih proizvoda	50	Synthol	PCR u realnom vremenu	GM-503-50-50
Set reagensa “Amplitub-RV” komplet br. 1 („M-Sorb-Kada“) za izolaciju DNK mikobakterije iz kliničkih uzoraka i ćelija kulture (na magnetnim česticama)	50	Synthol	PCR u realnom vremenu	OM-505
Set reagensa “DNK-Extran-1” za izolaciju genomske DNK iz pune krvi	100	Synthol	PCR u realnom vremenu	EX-509-100
Set reagensa “DNA-Extran-2” za ekstrakciju DNK iz životinjskih i ljudskih tkiva	100	Synthol	PCR u realnom vremenu	EX-511
Set reagensa “DNA-Extran-3” za ekstrakciju DNK iz bakterijskih kultura	100	Synthol	PCR u realnom vremenu	EX-512-100
Set reagensa “DNA-Extran-3” za ekstrakciju DNK iz biljnih tkiva	100	Synthol	PCR u realnom vremenu	EX-513-100
Set reagensa “K-Sorb” za izolaciju ukupne DNK na kolonama (iz krvi, pljuvačke, urina, ćelijskih kultura, struganja epitelnih ćelija)	100	Synthol	PCR u realnom vremenu	EX-514-100
	48 reakcija	Synthol	PCR u realnom vremenu	GM-443-48
Set reagensa "Soya / 35S+FMV / NOS screening"	50 reakcija	Synthol	PCR u realnom vremenu	GM-416-50