Zusammensetzung des DNA-Isolierungskits „DNA-sorb-PCR“. Reagenzien zur Reinigung und Isolierung von Nukleinsäuren Synthol

„„DNA-sorb-S-M“ ® AmpliSens FBUN Zentrales Forschungsinstitut für Epidemiologie von Rospotrebnadzor, Nur für Forschungszwecke Russische Föderation, 111123, und andere nichtmedizinische Zwecke, Moskau, ..."

ANWEISUNGEN

zur Verwendung des Reagenzienkits

zur DNA-Extraktion aus biologischem Material

„DNA-sorb-S-M“

AmpliSense

FBUN Zentrales Forschungsinstitut für Epidemiologie

Rospotrebnadzor,

Nur zu Forschungszwecken

Russische Föderation, 111123,

und andere nichtmedizinische Zwecke

Stadt Moskau, Novogireevskaya-Straße, Gebäude 3A

ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS

ZWECK

PRINZIP DER METHODE

Formen der Vervollständigung

EXTRAKTION VON DNA AUS BIOLOGISCHEM MATERIAL VON TIEREN................ 8

TIERFUTTER ODER PFLANZLICHE ROHSTOFFE

IN DRUCKPRODUKTEN VERWENDETE SYMBOLE

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 2 von 15

ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS

IN dieser Anleitung Folgende Abkürzungen und Bezeichnungen werden verwendet:

DNA – Desoxyribonukleinsäure NA – Nukleinsäuren OK – negative Extraktionskontrolle OKO – negative Kontrollprobe PC – Positive Kontrolle Extraktion PKO – positive Kontrollprobe PCR – Polymerase-Kettenreaktion

– Bundes staatlich finanzierte Organisation Wissenschaften

FBUN Zentrales Forschungsinstitut

„Zentrales Forschungsinstitut für Epidemiologie und Epidemiologie“ Bundesdienst für die Aufsicht im Bereich Rospotrebnadzor zum Schutz der Verbraucherrechte und des menschlichen Wohlergehens

ZWECK

Das Reagenzienkit „DNA-sorb-S-M“ ist für die DNA-Extraktion aus biologischem Material von Tieren bestimmt: Gewebe (Biopsie (Haut und Schleimhäute)) Urogenitalsystem, Magen-Darm-Trakt, Bronchien), chirurgisches und Autopsiematerial; und DNA-Extraktion aus Lebensmitteln, biologischen Zusatzstoffen, Tierfutter oder Pflanzenmaterialien für die anschließende Forschung mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR).

Die DNA-Extraktion ist ein präanalytisches Verfahren der PCR-Methode.

Volumen der zu extrahierenden Testprobe: 100 µl (Zulässig sind Proben mit einem Volumen von 10 bis 100 µl oder einem Gewicht von 10 bis 100 mg)1.

AUFMERKSAMKEIT! Informationen zum Entnahmeverfahren, zu den Bedingungen für den Transport und zur Lagerung des Testmaterials, zur Notwendigkeit und zum Verfahren seiner Vorbereitung für die DNA-Extraktion sowie Informationen zu störenden Substanzen und Einschränkungen im Zusammenhang mit der Probe finden Sie in den Anweisungen für den Reagenziensatz zur Verstärkung genutzt.

PRINZIP DER METHODE

Die Testprobe2 wird mit einer Lyselösung behandelt, die Proteinase K enthält, was zur Zerstörung von Zellmembranen und zur Freisetzung von NK und Zellbestandteilen führt. Gelöste NCs binden an Sorbenspartikel, während andere Komponenten des lysierten Testmaterials in Lösung bleiben und bei der Sorbensfällung entfernt werden. Beachten Sie je nach zu testendem Material die Anweisungen des verwendeten Amplifikationsreagenzien-Kits.

Einige Arten von biologischem Material erfordern einen Probenvorbereitungsschritt. Cm.

Anweisungen für das zur Amplifikation verwendete Reagenzienkit.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 3 von 15 durch Zentrifugation und anschließendes Waschen des Sorbens. Wenn dem Sorbens ein Elutionspuffer zugesetzt wird, gelangt der NC von der Silica-Oberfläche in die Lösung, die durch Zentrifugation von den Sorbenspartikeln getrennt wird. Als Ergebnis dieses Verfahrens wird ein hochreines NA-Präparat erhalten, das frei von Inhibitoren der Amplifikationsreaktion ist, was eine hohe analytische Sensitivität der PCR-Studie gewährleistet.

Formen der Vervollständigung

Das Reagenzienkit ist in zwei Konfigurationen erhältlich:

Form 1 enthält einen Reagenziensatz „DNA-sorb-S-M“ Version 50.

Form 2 enthält einen Reagenziensatz „DNA-sorb-S-M“ Version 100.

VORSICHTSMASSNAHMEN UND ENTSORGUNGSINFORMATIONEN

Bei der Untersuchung von biologischem Material von Tieren müssen die Arbeiten gemäß den Vorschriften des Ministeriums für Landwirtschaft und Erdöl der Russischen Föderation vom 27. Januar 1997 Nr. 13-7-2/840 „Regeln für die Durchführung von Arbeiten in der Diagnostik“ durchgeführt werden Labore, die die Polymerase-Kettenreaktionsmethode anwenden. „Grundlegende Bestimmungen“, genehmigt von der Abteilung für Veterinärmedizin.

Bei der Untersuchung von Lebensmitteln, biologischen Zusatzstoffen, Tierfuttermitteln oder pflanzlichen Rohstoffen müssen die Arbeiten in Übereinstimmung mit den Anforderungen der Richtlinien MU 1.3.2569-09 „Organisation der Arbeit von Laboratorien unter Verwendung von Nukleinsäureamplifikationsmethoden bei der Arbeit mit“ durchgeführt werden Material, das Mikroorganismen der Pathogenitätsgruppen I–IV enthält“ und GOST R 53214-2008 „Lebensmittel“. Analysemethoden zum genetischen Nachweis veränderte Organismen und daraus gewonnene Produkte.

Allgemeine Anforderungen und Definitionen.“

Bei der Arbeit müssen Sie stets die folgenden Anforderungen einhalten:

– Der Laborprozess sollte unidirektional sein. Die Analyse erfolgt in getrennten Räumen (Zonen). Die Arbeiten sollten in der Extraktionszone beginnen und in der Verstärkungs- und Nachweiszone fortgesetzt werden. Geben Sie keine Proben, Geräte oder Reagenzien in den Bereich zurück, in dem der vorherige Prozessschritt durchgeführt wurde.

– Unbenutzte Reagenzien, abgelaufene Reagenzien sowie Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 4 von 15 gebrauchte Reagenzien, Verpackungen3, biologisches Material, einschließlich Materialien, Instrumente und Gegenstände kontaminiertes biologisches Material , sollten gemäß den Anforderungen von SanPiN 2.1.7.2790-10 „Sanitäre und epidemiologische Anforderungen an die Entsorgung medizinischer Abfälle“ entsorgt werden.

– Verwenden und wechseln Sie bei jedem Vorgang Einwegspitzen für automatische Filterpipetten4. Einweggeschirr aus Kunststoff muss in einem speziellen Behälter entsorgt werden, der ein Desinfektionsmittel enthält, das zur Desinfektion verwendet werden kann medizinischer Abfall.

– Geschirr (Mörser und Stößel) und Metallinstrumente (Skalpelle, Scheren, Pinzetten, Mixeraufsätze usw.), die zur Probenvorbereitung verwendet werden, werden in einer Desinfektionslösung (z. B. 0,2 %ige Lösung des Natriumsalzes der Dichlorisocyanursäure) aufbewahrt Eine Stunde lang gewaschen, mit Leitungswasser mit Tensidwaschmitteln gewaschen und nach dem Waschen in fließendem und entionisiertem Wasser 4 Stunden lang in einem Trockenofen bei einer Temperatur von 180 °C getrocknet.

– Das Reagenzienkit ist für den einmaligen Gebrauch zur Durchführung der Untersuchung der angegebenen Anzahl von Proben bestimmt (siehe Abschnitt „Zusammensetzung“).

– Das Reagenzienkit ist gemäß dieser Anleitung gebrauchsfertig.

Verwenden Sie das Reagenzienkit ausschließlich für den vorgesehenen Zweck.

– Verwenden Sie das Reagenzienkit nicht, wenn die Innenverpackung beschädigt ist oder Aussehen Das Reagenz stimmt nicht mit der Beschreibung überein.

– Verwenden Sie das Reagenzienkit nicht, wenn die Transport- und Lagerbedingungen gemäß den Anweisungen nicht eingehalten werden.

Nicht verwendete Reagenzien, abgelaufene Reagenzien, gebrauchte Reagenzien und Verpackungen gehören zur Gefahrenklasse des medizinischen Abfalls G.

Einwegspitzen ohne Filter werden verwendet, um den Überstand während des Extraktionsprozesses mit einem Vakuumsauger zu entfernen.

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 5 von 15

– Verwenden Sie das Reagenzienkit nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr.

– Tragen Sie bei der Arbeit mit Proben und Reagenzien puderfreie Einweghandschuhe, Laborkittel und Augenschutz. Nach Beendigung der Arbeit gründlich die Hände waschen. Alle Arbeiten werden nur mit Handschuhen durchgeführt, um den Kontakt mit dem menschlichen Körper zu vermeiden.

– Einatmen der Dämpfe, Kontakt mit Haut, Augen und Schleimhäuten vermeiden, nicht schlucken. Bei Kontakt die betroffene Stelle sofort mit Wasser abspülen und ggf. ärztlichen Rat einholen. medizinische Versorgung.

– Sicherheitsdatenblätter für Reagenzien (SDS – Safety Data Sheet) sind auf Anfrage erhältlich.

Bewertung wahrscheinlicher Ereignisse, die dazu führen können negative Konsequenzen für den menschlichen Körper:

Bei bestimmungsgemäßer Verwendung und Einhaltung der oben genannten Vorsichtsmaßnahmen ist ein Kontakt mit dem menschlichen Körper ausgeschlossen.

In Notsituationen ist Folgendes möglich:

– Reizungen der Augenschleimhaut bei empfindlichen Personen,

– Hautreizungen bei empfindlichen Personen,

- allergische Reaktion,

– Schaden beim Einatmen,

- Schädlich bei oraler Einnahme.

Spezifische Wirkungen des Reagenzienkits auf den menschlichen Körper:

– Es besteht keine krebserzeugende Wirkung.

– Es besteht keine mutagene Wirkung.

– Keine Reproduktionstoxizität.

ZUSÄTZLICHE MATERIALIEN UND AUSRÜSTUNG

(mit Angabe der Hersteller/Lieferanten):

1. 1,5 und 5,0 ml Einweg-Röhrchen aus Polypropylen zum Aufschrauben oder mit dichtem Verschluss (z. B. Axygen, Inc.

(„Exigen, Inc“), USA, o.ä.).

2. Einwegspitzen für Pipetten mit variablem Volumen mit einem Filter bis 200 und bis 1000 µl (z. B. Axygen, Inc., USA, oder ähnlich).

3. Einwegspitzen für Pipetten mit variablem Volumen bis 200 µl (z. B. Axygen, Inc., USA oder ähnlich).

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 6 von 15

4. Gestelle für 1,5-ml-Röhrchen (z. B. Axygen, Inc., USA oder ähnlich).

5. Laminar-Flow-Haube, biologische Sicherheitsklasse II Typ A (zum Beispiel „BAVp-01-„Laminar-S“-1,2“, JSC „Laminar Systems“, Russland oder ähnlich).

6. Thermostat für Eppendorf-Röhren von 25 bis 100 °C (z. B. SIA Biosan, Lettland oder ähnlich).

7. Thermostat-Shaker für Eppendorf-Röhrchen von 25 bis 100 °C (z. B. TS-100, SIA Biosan, Lettland oder ähnlich).

8. Mikrozentrifuge für Eppendorf-Röhrchen mit maximale Geschwindigkeit Zentrifugation von mindestens 12.000 g (z. B. MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Germany oder ähnliches).

9. Vortex (zum Beispiel SIA Biosan, Lettland oder ähnlich).

10. Medizinischer Vakuumsauger mit Auffangkolben zum Entfernen überstehender Flüssigkeit (z. B. „OM-1“, LLC „Utes“, Russland oder ähnlich).

11.Automatische Spender mit variablem Volumen (z. B. Biohit LLC, Russland oder ähnliches).

12. Kühlschrank von 2 bis 8 °C mit Gefrierfach von minus 24 bis minus 16 °C.

13. Separate Robe, Hüte, Schuhe und Einweghandschuhe gemäß MU 1.3.2569-09.

14.Einweg Kunststoffbehälter zur Entsorgung und Inaktivierung von Materialien.

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EXTRAKTION VON DNA AUS BIOLOGISCHEM MATERIAL VON TIEREN

2. Wählen Sie die erforderliche Anzahl von 1,5-ml-Einweg-Polypropylenröhrchen mit Schraub- oder dicht schließenden Deckeln aus (einschließlich negativer und positiver Extraktionskontrollen, sofern für die PCR-Studie vorgesehen).

Bei Lagerung des Lysereagenzpuffers und der Waschlösung 1 bei einer Temperatur von 2 bis 8 C ist die Bildung eines Niederschlags in Form von Kristallen möglich.

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 8 von 15

3. Geben Sie 10 µl BKO6 in jedes Röhrchen (sofern es für die PCR-Forschung vorgesehen ist). Geben Sie 400 µl Lysereagenzpuffer und 17 µl Lysereagenz in die Röhrchen.

4. Geben Sie 100 µl der Testproben6 in die vorbereiteten Röhrchen und verwenden Sie dabei für jede Probe eine separate Spitze mit Filter.

AUFMERKSAMKEIT! 400 µl Puffer für Lysereagenz und 17 µl Lysereagenz können in ein Röhrchen mit der benötigten Menge der Testprobe gegeben werden und dort können 10 µl BKO7 hinzugefügt werden (sofern es für die PCR-Forschung vorgesehen ist), indem separate Spitzen verwendet werden ein Filter.

5. 100 μl NCO in das Extraktionsröhrchen der Negativkontrolle (NC) geben, 90 μl NKO und 10 μl PCO in das Extraktionsröhrchen der Positivkontrolle (PC) geben (falls Extraktionskontrollen für PCR-Studien bereitgestellt werden).6

6. Schließen Sie die Deckel fest, mischen Sie gründlich und vermischen Sie die Tropfen.

Stellen Sie die Röhrchen 1 Stunde lang in einen Thermostat mit einer Temperatur von 64 °C und mischen Sie sie regelmäßig durch Vortexen (fünfmal alle 10–12 Minuten). Die Inkubationszeit beträgt 12 Stunden bei einer Temperatur von 60 °C.

7. Pelletieren Sie ungelöste Probenpartikel durch 5-minütige Zentrifugation bei 10.000 g (z. B. 12.000 U/min für eine MiniSpin-Mikrozentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

8. Nehmen Sie die überstehende Flüssigkeit in einem Volumen von 200–350 µl sehr vorsichtig (unter Vermeidung suspendierter Partikel und Fetttröpfchen) mit separaten Spitzen mit Filtern auf und übertragen Sie sie in neue Röhrchen. Sedimentieren Sie die Tropfen im Wirbel.

9. Das Universalsorbens unter kräftigem Vortexen resuspendieren. Geben Sie 25 µl resuspendiertes Universalsorbens in jedes Röhrchen mit separater Spitze und schließen Sie die Deckel fest.

Durch Vortexen mischen, 10 Minuten in einem Gestell stehen lassen und alle 2 Minuten umrühren.

Es ist möglich, das Volumen der Test- und Kontrollproben zu ändern; siehe Anweisungen für den verwendeten Reagenziensatz für die Amplifikation.

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 9 von 15

18.Wiederholen Sie den Waschvorgang gemäß den Absätzen. 15–16, entfernen Sie den Überstand vollständig.

19. Stellen Sie die Reagenzgläser mit geöffneten Deckeln für 5–10 Minuten in einen Thermostaten bei 64 °C, um das Universalsorbens zu trocknen.

20. 50–100 μl Elutionspuffer B in die Röhrchen geben (siehe Anleitung des verwendeten Amplifikationsreagenzkits).

Durch Vortexen mischen, bis das Sorptionsmittel vollständig resuspendiert ist. Für 5–10 Minuten in einen Thermostat bei 64 °C stellen und dabei regelmäßig (einmal pro Minute) mit einem Vortex umrühren.

Gereinigte DNA kann eine Woche lang bei einer Temperatur von 2 bis 8 °C, 6 Monate lang bei einer Temperatur von minus 24 bis minus 16 °C und ein Jahr lang bei einer Temperatur von nicht mehr als minus 68 °C gelagert werden. Dazu ist es notwendig, die überstehende Flüssigkeit ohne Auffangen des Sorptionsmittels in ein neues Reagenzglas zu überführen.

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 10 von 15

EXTRAKTION VON DNA AUS LEBENSMITTELN, BIOLOGISCHEN ZUSATZSTOFFEN,

TIERFUTTER ODER PFLANZLICHE ROHSTOFFE

AUFMERKSAMKEIT! Informationen zum Verfahren zur Vorbereitung von biologischem Material für die DNA-Extraktion und zum Volumen der Testprobe finden Sie in den Anweisungen des verwendeten Amplifikationsreagenzkits.

1. Erwärmen Sie den Lysereagenzpuffer und die Waschlösung 1, wenn sie bei einer Temperatur von 2 bis 8 °C gelagert wurden, auf eine Temperatur von 64 °C, bis die Kristalle vollständig aufgelöst sind.

2. 1,5-ml-Röhrchen mit vorbehandelten Testproben in ein Rack stellen (Probenvolumen/-menge siehe Anleitung des verwendeten Amplifikationsreagenzien-Kits).

3. Bereiten Sie ein 1,5-ml-Einweg-Polypropylenröhrchen mit einer Schraub- oder dicht schließenden Kappe für die negative Extraktionskontrolle (EC) vor. 100 µl OKO in das Reagenzglas geben.

4. Geben Sie 400 μl Puffer für das Lysereagenz und 17 μl des Lysereagenz in die Reagenzgläser mit den Testproben und TC.

5. Schließen Sie die Deckel fest, mischen Sie gründlich und vermischen Sie die Tropfen.

Stellen Sie die Röhrchen 1 Stunde lang in einen Thermostat mit einer Temperatur von 64 °C und mischen Sie sie regelmäßig durch Vortexen (5 Mal alle 10–12 Minuten) oder verwenden Sie einen Schüttelthermostat.

6. Pelletieren Sie ungelöste Probenpartikel durch 5-minütige Zentrifugation bei 10.000 g (z. B. 12.000 U/min für eine MiniSpin-Mikrozentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Wählen Sie die erforderliche Anzahl neuer 1,5-ml-Einwegröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss oder dicht schließendem Verschluss aus.

8. Das Universalsorbens unter kräftigem Vortexen resuspendieren. Geben Sie 25 µl resuspendiertes Universalsorbens in jedes Röhrchen mit separater Spitze und schließen Sie die Deckel fest.

9. Nehmen Sie aus den Röhrchen mit lysierten Proben die überstehende Flüssigkeit in einem Volumen von 200–350 µl sehr vorsichtig (um das Eindringen von suspendierten Partikeln und Fetttropfen zu vermeiden) mithilfe separater Spitzen mit Filtern und übertragen Sie sie in Röhrchen mit einem Sorptionsmittel. Durch Vortexen mischen, 10 Minuten in einem Gestell stehen lassen und alle 2 Minuten umrühren.

Formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / Seite 11 von 15

10. Zentrifugieren Sie die Röhrchen 1 Minute lang in einer Mikrozentrifuge bei 2.000 g (z. B. 5.000 U/min für eine MiniSpin-Mikrozentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

11. Entfernen Sie die überstehende Flüssigkeit aus jedem Röhrchen mit einer separaten 200-µl-Spitze ohne Filter und unter Verwendung eines Vakuumsaugers, ohne das Sorbens aufzufangen.

12. 300 μl Waschlösung 1 in die Reagenzgläser geben, Deckel fest verschließen und so lange vortexen, bis das Universalsorbens vollständig resuspendiert ist.

13. Zentrifugieren Sie die Röhrchen 1 Minute lang in einer Mikrozentrifuge bei 2.000 g.

14. Ohne das Sorbens aufzufangen, entfernen Sie die überstehende Flüssigkeit aus jedem Röhrchen mit einer separaten Spitze ohne Filter von 200 µl und verwenden Sie dazu einen Vakuumsauger.

15. 500 μl Waschlösung 2 in die Reagenzgläser geben, Deckel fest verschließen und vortexen, bis das Universalsorbens vollständig resuspendiert ist

16. Zentrifugieren Sie die Röhrchen 1 Minute lang in einer Mikrozentrifuge bei 7.000 g (z. B. 10.000 U/min für eine MiniSpin-Mikrozentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

17. Entfernen Sie die überstehende Flüssigkeit aus jedem Röhrchen mit einer separaten 200-µl-Spitze ohne Filter und unter Verwendung eines Vakuumsaugers, ohne das Sorbens aufzufangen.

18.Wiederholen Sie den Waschvorgang gemäß den Absätzen. 15-16, entfernen Sie den Überstand vollständig.

19. Stellen Sie die Reagenzgläser mit geöffneten Deckeln für 5–10 Minuten in einen Thermostaten mit einer Temperatur von 64 °C, um das Universalsorbens zu trocknen.

20. 50 µl Elutionspuffer B in die Röhrchen geben. Vortexen, bis das Sorbens vollständig resuspendiert ist. Für 5–10 Minuten in einen Thermostat bei 64 °C stellen und dabei regelmäßig (einmal pro Minute) mit einem Vortex umrühren.

21. Zentrifugieren Sie die Röhrchen 1 Minute lang in einer Mikrozentrifuge bei 10.000 g. Der Überstand enthält gereinigte DNA. Die Proben sind für die PCR bereit.

Gereinigte DNA kann bei einer Temperatur von 2 bis 8 °C eine Woche lang, bei einer Temperatur von minus 24 bis minus 16 °C sechs Monate lang und bei einer Temperatur Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12 gelagert werden /27/16 / Seite 12 von 15 Ganzjährig nicht mehr als minus 68 °C. Dazu ist es notwendig, die überstehende Flüssigkeit ohne Auffangen des Sorptionsmittels in ein neues Reagenzglas zu überführen.

HALTBARKEIT, TRANSPORT- UND LAGERBEDINGUNGEN.

Verfallsdatum. 12 Monate Abgelaufene Reagenzienkits können nicht verwendet werden. Das Verfallsdatum der geöffneten Reagenzien entspricht dem auf den Etiketten der ungeöffneten Reagenzien angegebenen Verfallsdatum, sofern in der Anleitung nichts anderes angegeben ist.

Transport. Der Reagenziensatz sollte bei Temperaturen von 2 bis 8 °C nicht länger als 5 Tage in Thermobehältern mit kalten Elementen in allen Arten von überdachten Fahrzeugen transportiert werden. Nach Erhalt entsprechend den angegebenen Lagertemperaturen zerlegen.

Lagerung. Lagern Sie das Reagenzienkit mit Ausnahme des Lysereagenz bei einer Temperatur von 2 bis 25 °C. Lagern Sie das Lysereagenz im Kühlschrank bei einer Temperatur von 2 bis 8 °C.

Kühlkammern müssen geregelte Temperaturbedingungen bieten.

Lyselösung 30 cm 3,

Waschlösung 1 30 cm 3,

Konzentrat für Reinigungslösung 2 20 cm 3,

Sorptionssuspension 2 cm 3,

DNA-Elutionspuffer 4 cm 3 .

Gebrauchsprozedur:

Bereiten Sie Reinigungslösung 2 vor, indem Sie 20 cm 3 des Konzentrats aus dem Kit, 80 cm 3 destilliertes Wasser und 100 cm 3 96 %iges Ethanol in einer separaten Flasche mischen. Bewahren Sie die Lösung bei auf Zimmertemperatur in einer fest verschlossenen Flasche.

Überprüfen Sie den Zustand des Sorptionsmittels – beim Absetzen sollte es etwa die Hälfte des Volumens der Suspension einnehmen.

In ein fest verschlossenes 1,5 cm 3 Polypropylenröhrchen (vorzugsweise mit Schraubverschluss) 100 µl einer vorbereiteten Testprobe, Negativ- oder Positivprobe, 300 µl Lyselösung (zu jeder Probe mit einer separaten Spitze) geben und mischen gründlich durch 3- bis 10-maliges Pipettieren.

Geben Sie 15–20 µl des resuspendierten Sorbens hinzu, mischen Sie es gut durch Vortexen und stellen Sie es 5–7 Minuten lang in ein Gestell, damit das Sorbens vollständig sedimentiert.

Sedimentieren Sie das Sorptionsmittel 30 Sekunden lang in einer Mikrozentrifuge bei 3-8.000 U/min. Nehmen Sie den Überstand aus jedem Röhrchen mit einer separaten Spitze (am besten verwenden Sie eine Vakuumabsaugung).

300 µl Waschlösung 1 hinzufügen, mit dem Vortex mischen, bis das Sorbens vollständig resuspendiert ist (wenn das Sorbens stark zerfällt, mit einer Pipette zerkleinern), in einer Zentrifuge bei 4-8.000 U/min 30 Sekunden lang sedimentieren. Sammeln Sie den Überstand aus jedem Röhrchen mit einer separaten Spitze.

800 μl Waschlösung 2 hinzufügen, vortexen, bis das Sorbens vollständig resuspendiert ist, in einer Mikrozentrifuge bei 6–10.000 U/min 30 Sekunden lang sedimentieren und den Überstand sammeln.

Wiederholen Sie Schritt 6, wählen Sie den Überstand sorgfältig aus und trocknen Sie das Sorptionssediment 5 Minuten lang in einem Thermostat bei 65 °C.

Das Sorbens in 30–40 μl Elutionspuffer resuspendieren, 5 Minuten lang in einen Thermostat bei 65 °C stellen und regelmäßig vortexen.

Sediment in einer Mikrozentrifuge bei maximaler Geschwindigkeit für 1 Minute.

Die Probe ist bereit für die PCR; der Überstand enthält gereinigte DNA.

Als Negativkontrolle während des DNA-Extraktionsschritts muss Kochsalzlösung oder entionisiertes Wasser verwendet werden.

Die Effizienz der DNA-Extraktion mit dem DNA-sorb-PCR-Kit beträgt 30 – 60 %.

Klinisches Material	Plasma, Serum	Kratzen, Sperma, Rachenspülungen, Urin	Biopsie, Blut, Kot
Anzahl der Pipettierungen
Sorptionsmittelvolumen
Ablagerungsrate des Sorptionsmittels	8.000 U/min	6.000 U/min	3-4.000 U/min
Eluentenvolumen
Effizienz der DNA-Extraktion

5.2. Stufe 2. Einrichten der PCR-Zusammensetzung des Kits für die PCR-Amplifikation:

5x Reaktionspuffer. 1000 µl (viskose, transparente blaue Lösung)

Entionisiertes Wasser.2000 µl

Nukleotidmischung.500 µl

Taq-Polymerase.100 µl

Primermischung.500 µl

Wachs für PCR.2000 µl

Positivkontrolle: 100 µl

Negativkontrolle 100 µl

Mineralöl 4000 µl

Das Kit wird ein Jahr lang bei minus 20 °C gelagert.

Die schnelle Mikrosäulen-DNA-Extraktionsmethode ist für die Extraktion der Gesamt-DNA aus Blut, Plasma, Speichel, Urin, Zellkulturen und allen Zellpellets in Puffer konzipiert. Die hohe Reinheit der isolierten DNA ermöglicht den Einsatz für alle Arten von Analysen.

Die Isolationszeit liegt je nach Anzahl der Proben zwischen 30 und 45 Minuten.

• Durch die effektive Bindung von DNA an die Säulenmembran können Sie die höchste DNA-Ausbeute aus der Probe erzielen.
• Durch die optimierte Zusammensetzung der Komponenten der Lyse- und Waschlösungen wird ein hoher Reinigungsgrad erreicht;
• deutlich reduzierte Fragmentierung und DNA-Verlust beim Waschen im Vergleich zu anderen Sorptionsextraktionsmethoden;
• es ist möglich, DNA zu konzentrieren, indem das Volumen der Elutionslösung reduziert wird;
• Die DNA-Extraktion auf Säulen reduziert den Verbrauch an zusätzlichem Plastik deutlich;
• maximales Probenvolumen - 200 µl;
• das Kit enthält Proteinase K;
• die Reinheit der isolierten DNA beträgt 1,8–1,9 entsprechend dem Verhältnis A260/A280;
• Die Menge der extrahierten DNA hängt von der Art und Menge der Probe ab. Die DNA-Ausbeute aus 200 µl Blut beträgt durchschnittlich 5-6 µg.

Reagenziensatz zur Isolierung genomischer DNA „DNA-Extran“

Mit den Kits zur Isolierung genomischer DNA der DNA-Extran-Serie können Sie DNA aus einer Vielzahl von biologischem Material isolieren: Blut, Kulturen von Bakterien- und Tierzellen, frisches, gefrorenes oder getrocknetes Gewebe von Tieren und Pflanzen.

• vollständige DNA-Extraktion aus Zellen, wodurch DNA-Verlust und -Fragmentierung während der Reinigung minimiert werden;
• die isolierte DNA hat hohes Niveau Reinheit (Verhältnis A260/A280 = 1,8–1,9) und geeignet für PCR, Restriktionsverdau, Hybridisierung und andere Studien;
• Die Kits enthalten keine potenziell gefährlichen Bestandteile wie Phenol und Chloroform, erfordern keine großen Mengen an Kunststoff und erzeugen keinen giftigen Abfall.

Reagenziensatz für die DNA-Extraktion auf magnetischen Partikeln „M-Sorb-Tube“

Geeignet für die Isolierung mykobakterieller DNA aus Sputum, Bronchialspülungen, Liquor, Exsudat, Punktat, Biopsie, Urin, Ausfluss aus dem Genitaltrakt und Zellkulturen. Die vorläufige Verarbeitung des klinischen Materials erfolgt gemäß den Standardverfahren zur Probenvorbereitung für mikrobiologische Studien (Verordnung Nr. 109 des Gesundheitsministeriums der Russischen Föderation vom 21. März 2003 „Über die Verbesserung der Maßnahmen zur Tuberkulosebekämpfung in“) Russische Föderation", Anhang 11 „Anleitung für einheitliche Methoden der mikrobiologischen Forschung zur Erkennung, Diagnose und Behandlung von Tuberkulose“). Zur Inaktivierung von klinischem Material empfehlen wir die Verwendung der von uns entwickelten Inaktivierungslösung A.

Lösung A tötet Mykobakterien innerhalb von 12 Stunden ab und desinfiziert klinisches Material, das für weitere Analysen (DNA-Extraktion, PCR usw.) verwendet werden kann. Lösung A ist speziell für die Behandlung von Sputum geeignet und ersetzt das Standardverfahren mit NaOH-NALC-Lösung vollständig und verfügt über außergewöhnliche mukolysierende Eigenschaften. Inaktivierungslösung A erhöht die DNA-Ausbeute im Vergleich zur Standard-NaOH-NALC-Probenvorbereitung.

Die Isolierungstechnik umfasst: DNA-Lyse mit Guanidinisothiocyanat, DNA-Sorption an magnetischen Partikeln, DNA-Fällung durch Zentrifugation, Waschschritte und DNA-Elution. Kann zur Isolierung von DNA aus anderen Mikroorganismen verwendet werden.

Die Verwendung von mit Kieselgel beschichteten Magnetpartikeln als Sorbens ist im Vergleich zu anderen Sorbentien ein technologisch fortschrittlicheres und praktischeres Format und ermöglicht eine maximale Standardisierung und Automatisierung der DNA-Extraktionstechnik.

Zu jeder Testprobe wird eine interne Positivkontrolle (IPC) hinzugefügt; das Vorhandensein/Fehlen von RT-PCR-Inhibitoren und die Effizienz der DNA-Extraktion werden durch die IPC-Amplifikationsreaktion bestimmt.

Reagenzienkits für die DNA-Extraktion aus Lebensmitteln und Lebensmittelrohstoffen

Die Reagenzienkits „Sorb-GMO-A“ und „Sorb-GMO-B“ sind speziell für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien, Lebensmitteln und Futtermitteln konzipiert. Beide Kits verwenden Siliziumsorbens zur DNA-Reinigung. „Sorb-GMO-A“ enthält Guanidinchlorid als Lysemittel, „Sorb-GMO-B“ ist ein ionisches Detergens CTAB, das eine maximale DNA-Ausbeute aus Pflanzenbestandteilen ermöglicht. Unterscheidungsmerkmale Die Vorteile des Sorb-GMO-A-Kits sind die Geschwindigkeit der DNA-Extraktion und das Fehlen von Chloroform, was die Arbeit mit dem Kit sicherer macht.

Reagenziensatz zur DNA-Extraktion aus Wasserproben (auf magnetischen Partikeln) „M-Sorb-Leg“

Entwickelt für die Isolierung von Legionella-DNA aus Wasserteilchen Umfeld(Kühltürme, Schwimmbäder, Wasserparks, Warm- und Kaltwasserversorgungssysteme). Die minimale isolierte Legionellenkonzentration beträgt 100 Zellen pro 0,5 Liter Probe.

Das „M-Sorb-Leg“-Kit wird in zwei Modifikationen hergestellt: „M-Sorb-Leg1000“ für Wasserproben mit einem Volumen von 1-1000 ml und „M-Sorb-Leg1“ für Wasserproben mit einem Volumen von bis zu 1 ml. Das M-Sorb-Leg1000-Set ermöglicht die Wasserfiltration mithilfe eines Polycarbonatfilters.

Mit dem M-Sorb-Leg-Reagenzienset können Sie PCR-Inhibitoren entfernen, die in stark kontaminierten Wasserproben vorhanden sind.

• Die DNA-Isolierungstechnik basiert auf der Sorption von DNA an mit Kieselgel beschichteten Magnetpartikeln und der anschließenden Fällung mit einem Fällungsreagenz. Kombiniert die Vorteile von Sorptionsmethoden und der Totalfällungsmethode;
• Zu jeder Testprobe wird eine interne Positivkontrolle (IPC) hinzugefügt; das Vorhandensein/Fehlen von RT-PCR-Inhibitoren wird durch die IPC-Amplifikationsreaktion bestimmt.

Reagenziensatz zur DNA-Extraktion aus Umweltobjekten (auf magnetischen Partikeln) „M-Sorb-OOM“

Das M-Sorb-OOM-Reagenzienset ist für die Isolierung von DNA aus Umweltobjekten (Boden, Wasser, Tierkadaver usw.) vorgesehen, bei denen der Verdacht besteht, dass sie mit besonders gefährlichen Mikroorganismen (DOM) infiziert sind, um sie für die anschließende Analyse vorzubereiten RT-PCR. Das Isolierungsverfahren ähnelt dem für das M-Sorb-Leg-Kit beschriebenen.

Reagenziensatz zur RNA-Isolierung „RNA-Extran“

Das Kit dient zur Isolierung von RNA aus Blut, Gewebefragmenten und Zellkulturen. Die mit dem RNA-Extran-Kit gewonnene RNA kann sowohl für RT-PCR als auch für Hybridisierungsanalysen, In-vitro-Translation und Klonierung verwendet werden.

Das Prinzip der RNA-Isolierung basiert auf der sauren Phenolextraktion nach Khomchinsky, bei der nur RNA in der wässrigen Phase verbleibt und DNA im Komplex mit Proteinen in die organische Phase übergeht. Guanidinthiocyanat wird als Isolier- und Denaturierungsmittel für zelluläre Nukleasen verwendet.

ermöglicht Ihnen den Erhalt hochreiner RNA, frei von DNA-Verunreinigungen;

sorgt für die vollständige Extraktion von RNA aus Vollblut, Gewebefragmenten und Zellkulturen;

ermöglicht es Ihnen, unbeschädigte RNA zu erhalten;

• RNA-Isolierungszeit – 1 Stunde.

Katalognummer	Name	Anzahl der Reaktionen
EX-509	Reagenziensatz „DNA-Extran-1“ zur Isolierung genomischer DNA aus Vollblut	100
EX-511	Reagenziensatz „DNA-Extran-2“ für die DNA-Extraktion aus tierischen und menschlichen Geweben	100
EX-512	Reagenziensatz „DNA-Extran-3“ zur DNA-Extraktion aus Bakterienkulturen	100
EX-513	Reagenziensatz „DNA-Extran-4“ für die DNA-Extraktion aus Pflanzengeweben	100
EX-514	Reagenziensatz „K-Sorb“ zur Isolierung der Gesamt-DNA auf Säulen (aus Blut, Speichel, Urin, Zellkulturen, Abstrichen von Epithelzellen)	100
EX-515	Reagenzienset „RNA-Extran“ zur Isolierung von RNA aus Blut, Geweben, Zellkulturen	50
OM-505	Reagenziensatz „M-Sorb-Tub“ für die DNA-Extraktion aus klinischen Proben und Zellkulturen (auf magnetischen Partikeln)	50 oder 100
GM-502-50	„SORB-GMO-A“ (Guanidin + Sorbens) Reagenziensatz für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien und Lebensmitteln	50
GM-503-50	„SORB-GMO-B“ (CTAB+Sorbens) Reagenziensatz für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien und Lebensmitteln	50
OM-506	Reagenzienset „M-Sorb-Leg1000“ zur Isolierung von Legionellen-DNA aus Wasserproben bis 1000 ml (auf magnetischen Partikeln, Filter werden separat geliefert)	50 oder 100
OM-507	Reagenzienset „M-Sorb-Leg1“ zur Isolierung von Legionellen-DNA aus Wasserproben bis 1 ml Volumen (auf magnetischen Partikeln)	50 oder 100
OOM-502	Reagenziensatz „M-sorb-OOM“ zur DNA-Extraktion aus Umweltobjekten (auf magnetischen Partikeln)	50 oder 100

Bestellinformationen

Name	Volumen	Produktion	Methode	Katze nein.
„GMO-MagnoSorb“ (Guanidin + magnetisches Sorbens) Reagenziensatz für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien und Lebensmitteln	50 Zuteilungen	Synthol	Echtzeit-PCR	GM-505-50
„SORB-GMO-A“ (Guanidin + Sorbens) Reagenziensatz für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien und Lebensmitteln	50	Synthol	Echtzeit-PCR	GM-502-50-50
„SORB-GMO-B“ (CTAB+Sorbens) Reagenziensatz für die DNA-Extraktion aus Pflanzenmaterialien und Lebensmitteln	50	Synthol	Echtzeit-PCR	GM-503-50-50
Reagenzienset „Amplitub-RV“ Kit Nr. 1 („M-Sorb-Tub“) zur Isolierung mykobakterieller DNA aus klinischen Proben und Kulturzellen (auf magnetischen Partikeln)	50	Synthol	Echtzeit-PCR	OM-505
Reagenziensatz „DNA-Extran-1“ zur Isolierung genomischer DNA aus Vollblut	100	Synthol	Echtzeit-PCR	EX-509-100
Reagenziensatz „DNA-Extran-2“ für die DNA-Extraktion aus tierischen und menschlichen Geweben	100	Synthol	Echtzeit-PCR	EX-511
Reagenziensatz „DNA-Extran-3“ zur DNA-Extraktion aus Bakterienkulturen	100	Synthol	Echtzeit-PCR	EX-512-100
Reagenziensatz „DNA-Extran-3“ für die DNA-Extraktion aus Pflanzengeweben	100	Synthol	Echtzeit-PCR	EX-513-100
Reagenziensatz „K-Sorb“ zur Isolierung der Gesamt-DNA auf Säulen (aus Blut, Speichel, Urin, Zellkulturen, Abstrichen von Epithelzellen)	100	Synthol	Echtzeit-PCR	EX-514-100
	48 Reaktionen	Synthol	Echtzeit-PCR	GM-443-48
Reagenzienset „Soja / 35S+FMV / NOS-Screening“	50 Reaktionen	Synthol	Echtzeit-PCR	GM-416-50